بیان نوترکیب فاکتور رشد اپیدرم انسانی در باکتری E. coli و ارزیابی اثر آن بر دودمان سلولی NIH-3T3

نویسندگان

دانشگاه جامع امام حسین(ع)- دانشکده و پزوهشکده علوم پایه- مرکز تحقیقات زیست شناسی

چکیده

خانواده EGF شامل 13 عضو می باشد و فاکتور رشد اپیدرم انسانی یکی از اعضای این خانواده شناخته شده که در ترمیم زخم های اپیدرم پوستی ایفای نقش می کند. این فاکتور، یک پلی پپتید اساسی برای ترمیم زخم و آغاز تقسیم میتوزی است. در این مطالعه، ژن فاکتور رشد اپیدرم انسانی از بانک ژنی استخراج و پس از بهینه سازی کدون‌های آن براساس ترجیح کدونی باکتریE. coli در وکتور pET21a(+) سنتز گردید. وکتور حامل ژن مذکور به باکتری E. coli بعنوان میزبان بیانی انتقال یافت و پس از بیان، فرآیند تخلیص پروتئین با استفاده از روش کروماتوگرافی تمایلی انجام شد. نتیجه سنجش فعالیت زیستی در سه دُز مختلف نشان داد که این پلی پپتید نوترکیب بر تکثیر سلولی در دودمان سلولی NIH-3T3 تاثیرگذار است.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Recombinant Expression of Human Epidermal Growth Factor in E. coli and Assessment of its Effect in NIH-3T3 Cell line

نویسندگان [English]

  • Firouz Ebrahimi
  • Mostafa Bakhshi
  • Hosain Honari
  • Abbas Hajizadeh
چکیده [English]

The EGF family include13 members and the hEGF as founding member of this family involves in epidermal wound healing. Epidermal growth factor is an essential polypeptide for wound healing and promoting mitotic division. In this study, human epidermal growth factor gene was adapted from gene bank and its codons were optimized according to codon preference of E. coli BL21. The gene was prepared as synthetic construct in pET21a (+). Then the recombinant construct was transferred to E. coli and hEGF gene in the vector was expressed under the control of inducible T7 promoter. Purification was done using affinity chromatography. The bioassay results of three different doses showed that recombinant protein has significant effects on growth of NIH-3T3 cell line.

کلیدواژه‌ها [English]

  • recombinant hEGF
  • Synthetic gene
  • E. coli
  • NIH-3T3 cell line